TINCIÓN GRAM

ESCUELA NACIONAL PREPARATORIA NO.7 “EZEQUIEL. A. CHAVEZ”

INTEGRANTES:

Ø FERNANDEZ GALLEGOS JOSE AGUSTIN

Ø HERNANDEZ GUARNEROS ANDREA VIANEY

Ø MOGUEL SANTAMARIA DANIEL

Ø MUÑOZ GARNICA ALEJANDRA

GRUPO:

606

PRACTICA   5:

“TINCIÓN  GRAM”

TEMAS SELECTOS DE BIOLOGIA

Objetivo:

Diferenciar en la muestra si es Gram Positivo o Gram Negativo

Introducción:

Tipo de tinción diferencial empleado en bacteriología para la visualización de bacterias, sobre todo en muestras clínicas.

El cristal violeta penetra en todas las células bacterianas ( gram positivas y gram negativas) a través de la pared bacteriana. El lugol es un compuesto formado por I₂ (yodo) en equilibrio con KI (yoduro de potasio) y Sl (Siulterio), los cuales están presente para solubilizar el yodo, y actúan de mordiente, haciendo que el cristal violeta se fije con mayor intensidad a la pared de la célula bacteriana. El I₂ entra en las células y forma un complejo insoluble en solución acuosa con el cristal violeta..

La mezcla de alcohol-acetona que se agrega, sirve para realizar la decoloración, ya que en la misma es soluble el complejo I₂/cristal violeta. Los organismos gram positivos no se decoloran, mientras que los gram negativos sí lo hacen.

Para poner de manifiesto las células gram negativas se utiliza una coloración de contraste. Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina. Después de la coloración de contraste las células gram negativas son rojas, mientras que las gram positivas permanecen violetas.

La safranina puede o no utilizarse, no es crucial para la técnica. Sirve para hacer una tinción de contraste que pone de manifiesto las bacterias gram negativas. Al término del protocolo, las gram positivas se verán azul-violáceas y las gram negativas, se verán rosas (si no se hizo la tinción de contraste) o rojas (si se usó la safranina).

Material:

ü  Aza de siembro de tuxteno

ü  Caja de koplin

ü  Lámpara de alcohol

ü  Colorantes

ü  Microscopio compuesto

ü  Alcohol

ü  Agua destilada

Desarrollo:

Se esterilizó el aza de siembro colocándola sobre la lámpara de alcohol al rojo vivo, tomando muestra y enseguida aplicar al centro del portaobjetos, (al fijar la flama se matan los organismos)  Se enjuaga las veces necesarias sobre la caja de Koplin.

Enseguida se agrega el colorante Cristal violeta , agregando 1 gota por min, se enjuaga con la piseta en la caja de Koplin.

Agregamos Lugol en la misma muestra, después se enjuaga con alcohol. ( se lava la muestra)

Se aplica Safranina para determinar si es Gram Positivo o Gram Negativo. Se enjuaga y se limpia, lista para ser observada al microscopio.

Resultados:

Observamos la coloración de las muestras de yacult.

Resultados (imágenes):

                                                              Yacult 40x

Hipótesis:

F(x) muestra:

Se observara la muestra que está en portaobjetos al microscopio

G(x) muestra con colorante:

Se identificara si la muestra es Gram positiva o GRAM negativa según el color que presente

Conclusión:

Los microorganismos de la muestra observada mostraron una coloración morada, por lo tanto es una GRAM Positiva, lo que significa que tiene una capa gruesa de peptidoglicano el cual evita su decoloración.